细胞转染的救星---佐转剂Toxi-Blocker
   [降低转染细胞毒性,提高转染后细胞存活率]
Toxi-Blocker Transfection Supplement    TFP-101    1ml 1170元  

  转染-即把核酸导入细胞,已经成为当前生命科学研究中基本操作之一,转染方法有多种,包括介质介导和电穿孔,其中介质又有早期的磷酸钙法,脂质体法和病毒介导。目前使用最广泛的是脂质体介导法,有很多商品化转染试剂可供选择,很多公司,包括国内研究人员耳熟能详的InvitrogenRocheQiagenNovagen等等都开发生产了转染试剂,它们也的确帮助了多数研究者完成了转染实验。

  转染的关键是高转染效率和低细胞毒性,即把核酸转入尽可能多的细胞,又要使转染了核酸的细胞尽可能多地存活,且没有发生分化。虽然每个转染试剂生产商都致力于这两方面的改进,但是都没有得到突破性进展。佐转剂(Toxi-Blocker)的出现,为研究者提供了一种优良的解决方案。

  东洋纺公司一直致力于生化和生命科学试剂的研究和生产,此次成功开发的佐转剂(Toxi-Blocker)不会影响转染效率,但可以有效降低转染过程中外源物质对细胞产生的毒性,提高转染后细胞的生存率,大大提高转染实验的成功率。根据目前的数据,它在对HeLaCOS-7PC-12Neuro 2a等细胞株的转染实验中,跟对照组相比,可以大幅度提高转染后细胞的存活率,从而增加实验成功的概率。

[1] 前言

最近几年,为了把核酸转染进动物细胞,已有包括脂质体在内的多种转染试剂面世,并得到了广泛的应用。通常,
核酸导入细胞的同时,也都会产生细胞毒性而影响实验结果。本公司开发的佐转剂(Toxi-Blocker)可以抑制转染过程
对细胞产生的细胞毒性,从而提高转染后细胞的存活率。佐转剂(Toxi-Blocker)本身不会影响转染效率。
特点:使用简单
★只需在转染时加入佐转剂(Toxi-Blocker)(图1)。
★不必改变任何转染条件。
★通常会提高细胞存活率,同时不会降低转染效率,也不会导致细胞分化。

 

图1 使用Toxi-Blocker 的实验

[2] 产品内容
品 名 货 号 包 装 保存温度
Toxi-Blocker Transfection Supplement TFP-101 1ml 4℃
[3] 物品准备
(1) 细胞
准备合适的细胞株。本佐转剂的毒性抑制效果已在HeLa, COS-7, PC-12, and Neuro 2a 等细胞株中得到验证。
(2) 转染试剂
很多公司都提供转染试剂。有些转染试剂的毒性相对较强,加入本佐转剂后的效果会更加明显。


[4] 使用方法
使用本试剂的标准方法如下:
1. 用市售转染试剂将核酸转染入细胞。
注)转染前切勿加入佐转剂(Toxi-Blocker)。
注)转染条件参照相应的转染试剂说明书。
2. 转染5-7 小时后,按培养基量1%加入佐转剂(Toxi-Blocker)。
注)佐转剂加入的时机选择对毒性抑制效果和转染效率有很大影响,最好在转染试剂加入后5-7 小时之间。有
时提早至转染后3 小时加入,可取得更好的毒性抑制效果;另一方面,提早加入佐转剂有时会导致转染效
率低,细胞量少,此时可相应推迟加入佐转剂,甚至可在转染后12 小时再加入。
注)佐转剂的用量通常为起始培养基量的1%,如果效果不理想,也可以在0.2-5%之间调整其用量。
注)如果在加入佐转剂时更换培养基,细胞毒性可进一步降低。
3. 继续培养24-72 小时。
注)继续培养24 小时,有时可能对毒性抑制不够充分,可延长至36-72 小时。
注)佐转剂可能会影响检测结果。因此建议在换液后,留一个孔不添加佐转剂作对照;或者也可用一个不加转
染剂,只加佐转剂的孔作对照。
以下是使用本试剂的实例。
(1) Neuro 2a 细胞(来源:小鼠成神经细胞瘤)
1. 转染前一天,在12 孔板上培养Neuro 2a 细胞(1.0×105 细胞/孔)。
2. 加入1.6μg β-gal 表达质粒,4.0ul LipofectamineTM 2000(Invitrogen),进行转染。
※LipofectamineTM 是Invitrogen 公司的商标。
3. 转染4-10 小时后,加入10ul 佐转剂(Toxi-Blocker)。
4. 继续培养48 小时后,计算细胞存活率和转染效率。(参见图2,图3)

未添加
Toxi-Blocker(转染7 小时后添加)

更多的数据和说明请点击下载【产品说明书】

 
   

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